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第358章 将军与公主(番外)

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VirC

功能:VirC1可以和T-DNA末端序列外侧的增强驱动子序列结合。可以提高土壤农杆菌的致瘤性(通过提高VirD操纵子在T-DNA末端序列特异位点的缺刻式切割能力来实现);VirC2的功能目前尚不清楚。

VirD基因家族(1-4)

分别编码分子质量约为16.2、47.4、21.3和5.8kDa的四种不同的蛋白质分子,均与T-DNA加工有关。

VirD1:编码一种DNA松驰酶。

VirD2:①具N端的T-DNA末端切割能力;②含有核定位信号。VirD2与T-DNA共价结合后,可以引导复合物向植物细胞核方向运动。

VirD3:功能尚不清楚。不同类型的农杆菌菌种之间VirD3蛋白的同源性很小。

VirD4:N端带有一段信号肽序列,引导蛋白转运到细胞内膜。

VirE

编码的VirE2蛋白质是一种单链DNA结合蛋白。

功能:VirE2以共价的方式与经过加工的T-DNA分子的5’末端结合,形成T-复合物,以保护其免受核酸酶的降解。

VirF

可能的功能:协助T-DNA转移到宿主植物细胞中

VirH

功能:可能对植物产生的某些杀菌或者抑菌化合物起解毒作用,从而使农杆菌的生长不受这些物质的抑制

Tzs

编码与玉米素有关的细胞分裂素异戊(间)二烯基转移酶,可将玉米素分泌到细胞外(玉米素能促进农杆菌感染部位的植物组织脱分化和细胞分裂)

T-DNA整合到植物核基因组的必要条件。

(1)T-DNA边界序列

(2)Vir区基因

(3)农杆菌染色体上的基因

12、共整合载体系统的工作原理。

(1)农杆菌和大肠杆菌两个质粒具有一同源区

(2)两个质粒接合后经过同源重组形成一个大的共整合质粒

(3)将欲导入植物的外源基因在大肠杆菌中进行克隆和操作,与农杆菌Ti质粒同源重组后,此外源基因就定位于两个T-DNA边界序列之间

(4)大肠杆菌质粒不能在农杆菌中进行自主复制,所以不经过重组就无法在农杆菌中稳定存在

13、双元载体系统的工作原理。

(1)有辅助质粒和穿梭质粒组成

(2)辅助质粒:含有为T-DNA转移所必须的Vir区段,提供毒性基因功能;含有农杆菌复制起始子;没有T-DNA边界序列。

(3)穿梭质粒:具有1-2个T-DNA边界重复序列;广谱寄主范围复制功能和移动功能;细菌选择标记,如卡那霉素抗性基因;最近构建的穿梭载体携带有cosI复制起始子(来自

pBR322),所以可大量制备质粒;编码植物选择标记、表达信号,T-DNA边界序列;有用于外源基因亚克隆的多克隆位点

(4)两种质粒在单独存在的情况下都不具备诱发肿瘤的功能

(5)接合后,两个质粒在选择压下可以自主共存于同一农杆菌细胞中。当农杆菌感染受伤的植物时,Ti质粒上的Vir基因与穿梭质粒上的右边界序列发生反式相互作用,从而将T-DNA转移进入植物细胞。

14、比较共整合载体系统和双元载体系统的特点。

共整合载体系统:

双元载体系统:(1)由两个彼此相容的质粒组成,两个质粒可以自主共存在同一农杆菌细胞中(基本特点)

(2)不需体内重组

(3)仅需将一个质粒转入细菌

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